產品中心
PRODUCT CENTER
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貨號 |
產品名稱 |
產品規格 |
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MG101 |
BcMag? GST-標簽蛋白純化試劑盒
2 ml BcMag? Glutathione magnetic beads |
Each |
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MG102 |
BcMag? GST-標簽蛋白純化磁珠 |
5 ml |
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MG103 |
BcMag? GST-標簽蛋白純化磁珠 |
10 ml |
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產品屬性 |
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組成 |
連接有高密度谷胱甘肽的磁珠 |
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磁力大小 |
~60 EMU/g |
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磁化類型 |
超順磁性 |
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有效密度 |
2.5 g/ml |
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濃度 |
50 mg/ml (1x PBS) |
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結合能力 |
>2mg GST /ml 磁珠 |
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儲存 |
儲存在 4°C |
運輸條件: 常溫運輸
儲存條件: 在4oC儲存試劑盒.
簡介
BcMag? GST-Tagged protein purification magnetic beads是將高密度谷胱甘肽共價連接到磁性微球上。該微球結合了親和蛋白純化的所有優點（成本低、操作簡單、高特異性和大容量）和磁性，在使用手動操作或自動化快速高通量純化操作過程都適用。它是專門設計用于從各種類型樣品中捕獲和純化GST標記的蛋白質的一款磁珠產品。
工作流程
用磁性微粒進行蛋白純化的操作過程非常簡單（圖1）。只需要將磁性微粒與細胞裂解物混合，并連續旋轉培養足夠時間。在混合過程中，保持磁珠懸浮在樣品溶液中，使GST標簽的蛋白質與被固定的配體充分結合。孵育后，收集磁珠，并使用磁力分離器將磁珠從樣品中分離。然后，用過量的還原型谷胱甘肽洗脫下純化后的GST標簽的重組蛋白。
優勢及特點
l 快捷，簡單的一步法高通量操作;無需純化柱或過濾器，或重復移液、離心等操作。
l 穩定的共價鍵，最少的配體泄漏
l 極高結合能力，非常低的非特異性結合率
l 可根據實驗條件對樣品體積進行調整，便于自動化操作
l 產品重復效果好
產品應用
l 研究蛋白質結構和功能
l X射線晶體學的重組蛋白的制備
l 是研究蛋白質，與蛋白質或DNA相互作用的理想選擇材料
l 在免疫研究中，提高抗體與對應蛋白的結合和能力
l 即使使用粗細胞裂解液，也能有效篩選出表達的蛋白質
l GST標簽蛋白的微量純化
背景信息
谷胱甘肽-S-轉移酶（GST）是一種高度可溶和穩定的，26kDa大小的蛋白酶，可以對谷胱甘肽（GSH）的保護機制進行催化作用。許多真核蛋白質在原核表達系統（如大腸桿菌）中表達時，是以包涵體（不溶性聚集蛋白）的形式產生的，包涵體是一種由錯誤折疊引起的故障蛋白質聚合體。將包涵體蛋白重新折疊成為功能蛋白通常是非常困難的。GST蛋白也因為其本身的高穩定性和高溶解度被廣泛用作融合伙伴，用來促進目標蛋白質的更大量表達和溶解。此外，GST蛋白對其天然底物還原型谷胱甘肽還有很高的親和力。因此，GST作為親和標簽成為原核表達系統中活性重組產物單步純化的最常用工具。
谷胱甘肽是一種短肽（Glu-Cys-Gly），它對谷胱甘肽-S-轉移酶（GST）具有高度親和力。當將谷胱甘肽固定在色譜基質（如珠狀瓊脂糖或磁珠）中時，基質可以通過親和作用精確捕獲GST標記的蛋白質。通過將編碼目標蛋白質的DNA序列插入到表達載體中，GST標簽可以與蛋白質的C末端或N末端融合。如果需要，可以通過位點特異性蛋白酶將感興趣的蛋白質從GST標簽上切割下來。蛋白酶位點可以設計在GST標簽和目標蛋白質之間的連接肽鏈部分。
目前，谷胱甘肽的純化方式主要是固定在傳統的親和層析基質上，如瓊脂糖樹脂或純化柱。使用這些固體基質作為材料進行蛋白純化，純化過程非常繁瑣、耗時，且無法處理體積非常微小的樣品，并且難以適應自動化系統。Bioclone研發了一種高效的基于磁珠的GST標簽蛋白質純化系統來克服這些問題。
General references
· Frangioni, J.V. and Neel, B.G. (1993). Solubilization and purification of enzymatically active glutathione s-transferase (pGEX) fusion proteins. Anal Biochem 210:179-87.
· Simons, P.C. and VanderJagt, D.L. (1977). Purification of glutathione S-transferases for human liver by glutathione-affinity chromatography. Anal Biochem 82:334-41.
